Праблемы з герметызацыяй і забруджваннем на шматсейных клеткавых культуральных пласцінах

Загрузка і апрацоўка шматлікіх клеткавых культурных пласцін:

Пласцінка клеткавай культуры таксама вынікае з прынцыпу строгага Asepsis пры выкананні клеткавых аперацый. Усе аперацыі павінны быць стандартызаванымі і навуковымі і не прывядуць да дадатковага ўплыву на рост клетак. Самай распаўсюджанай праблемай з'яўляецца тое, як забяспечыць аднастайнасць клетак пасля дадання ўзору і мінімізаваць уплыў змены асяроддзя на стан росту клетак.

Спытайцеся:
Вечкі з 96 і 24-лункавых культурных пласцін або страў Петры вельмі свабодныя, што зручна для вентыляцыі, але будуць таксама праслізнуць бактэрыі, цвіль і іншыя забруджвальныя рэчывы?

Адказ:
Вечка вельмі друзлая, якая належыць да паўабароннай культуры, і мэта гэтага-праветрываць (на самай справе, гэта зрабіць CO2 па-за стравай культуры цалкам абменьвацца стравай культуры і захаваць значэнне рН культуры асяроддзе).
Усё мае перавагі і недахопы, што, вядома, павялічвае магчымасць забруджвання. Акрамя таго, гэта прыводзіць да выпарэння вадкасці ў страве, што характэрна для дакладнай дазавання лекаў. Таму неабходныя наступныя два меры: a. Паветра ў інкубатары павінен быць чыстым (рэгулярнае ўльтрафіялетавае святло, спіртнае спіртам, а інкубатар павінен быць адкрыты і закрыты як мага менш) b. Вільготнасць у інкубатары заўсёды павінна захоўвацца на 100% (ракавіна са стэрыльнай дыстыляванай вадой, размешчанай у інкубатары).
Гэтак жа, як і страва Петры, гэта таксама кантэйнер з крышкай уверх, і яна не будзе забруджана. У асноўным з -за негатыўнага ціску паветранага патоку, які ўтвараецца "L" краем вокладкі, ёсць мікраарганізмы, прымацаваныя да пылу, і пыл, які пераносіцца паветраным патокам, не можа праходзіць праз край крышкі, які стварае негатыўны ціск. Вентыляцыйны эфект ажыццяўляецца толькі праз дыфузію паветра, і не будзе створаны паветраны паток, таму ён будзе толькі дыхаць і не пранікаць у бактэрыі.

Спытайцеся:
Выкарыстоўваючы 24-лункавую пласцінку, ёсць аперацыі ў некаторых свідравінах (у ультра-чыстым лаве), і ў іншых свідравінах ёсць клеткі, якія трэба культываваць. Я хвалююся, што гэта прывядзе да забруджвання. Я не ведаю, на што звярнуць увагу?

Адказ:
Калі аперацыя стандартызавана ў ультра-чыстым лаве, гэта павінна быць нармальна. Я думаю, што вы можаце ў поўнай меры выкарыстоўваць вокладку культурнай пласціны, паспрабаваць выставіць толькі адтуліны, якія будуць працаваць, і пакрыць іншыя адтуліны на чахлах.
Разгледзім усебакова перад выкарыстаннем і ў поўнай меры скарыстайцеся ўсімі адтулінамі; Калі вам трэба выкарыстоўваць толькі некалькі адтулін, вы можаце выкарыстоўваць толькі адзін бок, а астатняе накрыць вокладкай. Я прызвычаіўся спачатку выкарыстоўваць правую адтуліну (зручна дадаваць узоры ў правую руку).

Пры працы выкарыстоўвайце некалькі шкляных слайдаў, каб падняць адзін бок дошкі, не адкрывайце вокладку цалкам, як правіла, ніякіх праблем.
Няроўнае распаўсюджванне і рашэнні клетак

Спытайцеся:
Клеткі прышчэплены на культурнай пласціне, і клеткі заўсёды збіраюцца ў перыферычнай частцы, як з ёй змагацца?

Адказ:
Ці магу я спытаць, як вашы клеткі неадназначныя? Гэта піпетынг ці дрыжанне культурнай пласціны? Калі гэта апошняе, і калі ён пахіснуты па крузе, вельмі верагодна, што клеткі будуць выкінуты на перыферычную частку з -за цэнтрабежнай сілы, што прывядзе да меншай колькасці клетак пасярэдзіне. Больш за чатыры тыдні!
Вось добры спосаб: перад тым, як вырошчваць насенную пласціну, пакладзеце культурную пласціну ў інкубатар на некалькі гадзін насычэння, а потым вымайце яе. Сіла павінна быць лёгкай пры пасадцы клетак. Даданне павольна дазваляе клеткавай завісі паступаць у лункі пліты, а культурныя клеткі ў асноўным раўнамерна растуць. Памятайце, што ніколі не трэсці з шейкерам, інакш вашы клеткі будуць сабрацца разам, як вы сказалі.
Чым менш дыяметр адтуліны культурнай пласціны, тым больш відавочны гэты з'ява. Гэта з'ява непазбежная для пласцін 24 і 96 лунак, таму што вадкасць прыляпляецца да сцяны, каб раствор культуры ў студні не ўтварала ўзровень вадкасці, але перыферыя высокая, як і ўвагнутае люстэрка. Аднак пры выкарыстанні гэтых двух відаў адтулінных пласцін немагчыма дадаць дастатковую колькасць раствора культуры з -за неабходнасці дадатковага ўмяшання, каб клеткі з'явіліся "калекцыяй краёў" разам з рашэннем культуры. Гэта залежыць ад таго, якія паказчыкі трэба назіраць. Калі гэта MTT, імунагістахімія паўплывае на вынікі з -за напластавання клетак.
Пры пераварванні клетак звярніце ўвагу на раўнамерна піпетынг, каб пазбегнуць камякоў клетак, а колькасць раствора культуры ў студні павінна быць дастатковай. Звычайна дадайце дастатковую колькасць культурнага раствора пры прышчэпцы, і змяніце рашэнне адзін раз пры даданні ўмяшання. Колькасць раствора культуры, дададзенага ў рашэнне ўмяшання, роўная колькасці раствора культуры на момант прышчэпкі, у гэтым выпадку з'ява "набору краёў" будзе палепшана, так што вы можаце паспрабаваць.

Спытайцеся:
Я зрабіў эксперымент па фарміраванні налёту. Лепш за ўсё распаўсюджваць клеткі ў раўнамерным пласце. Большасць адтулін выдатна падыходзяць, калі вірус прышчэплены, а некаторыя з іх не аднастайныя. У клеткавай групе ёсць вялікія адрозненні. Я хацеў бы спытаць вас, які метад вы выкарыстоўваеце пры даданні клетак?

Адказ:
Вельмі важна піпеткі клетак у аднакаляровую завісь пасля стрававання! Пераканайцеся, што колькасць вочак у кожнай лунцы адпавядае расшчапленню пласціны!
Вядома, ёсць і фактары апрацоўкі. Паралелізм паміж лункамі таксама вельмі важны. Напрыклад, пры даданні лекаў змяшайце лекі пасля развядзення, каб пераканацца, што канцэнтрацыя кожнай лункі паслядоўная!
Акрамя таго, пры даданні клетак і наркотыкаў тэставая група і кантрольная група павінны быць дададзены ў сваю чаргу, каб пазбегнуць розніцы ў шчыльнасці клетак і канцэнтрацыі лекаў, выкліканых паслядоўнасцю дадання ўзораў!

Спытайцеся:
Выдзіманне ўжо раўнамернае, але дошка, 6 дзірак і 24 дзіркі заўсёды некалькі нераўнамерныя, а ў сярэдзіне канцэнтраваны. Больш за тое, відавочна, што падлік робіцца, і праз дзень -два шчыльнасць кожнай адтуліны адрозніваецца, што паўплывае на выяўленне. Ці ёсць добры шлях?

Адказ:
Калі вы выкарыстоўваеце піпетку для пастэра, не сотуйце занадта шмат кожны раз, таму што клеткі ў піпеце аўтаматычна апускаюцца, часта колькасць клетак у першых некалькіх адтулінах вялікая, а клеткавая падвеска часта аднастайная, а вадкасць будзе будзе Выконвайце S-вобразны маршрут.
Калі вы выкарыстоўваеце піпетку, парады павінны быць апрацаваны і выдалены, каб пазбегнуць пашкоджання клетак, так што кожны раз, калі вадкасць прымаецца, адпавядае свідравіну. Больш дакладна дадаць адтуліну адзін на адзін з кончыкам. Але таксама звярніце ўвагу на змешванне падвескі.

Каб наладзіць паралельную групу, n павінна быць дастаткова вялікай (вы можаце разлічыць).

Не трэсціся пасля пакрыцця, бо дрыжанне прывядзе да агрэгацыі клетак да цэнтра. Лепш за ўсё плакаць.

Пласціна з порыстай клеткавай культуры Yongyue Medical заўсёды разглядала кантроль якасці як жыццё прадпрыемства і працягвала пастаяннае ўдасканаленне канкурэнтаздольнасці прадпрыемства. Кампанія заўсёды прытрымліваецца духу прадпрыемстваў падпарадкоўвацца законам і правілам, строгая з самадысцыплінаванасцю, паблажлівай і адважваючыся ўзяць на сябе адказнасць у якасці стандарту ў эксплуатацыі, падтрыманне і пашырэнне рынку з выдатнай якасцю і выдатным абслугоўваннем, а таксама сустрэча з патрэбы кліентаў у найбольшай ступені. . Безпронны выйгрыш з кліентамі-гэта наша мэта развіцця. Yongyue Medical! Ваш давераны партнёр. Мы гатовыя шчыра супрацоўнічаць з вамі, каб стварыць лепшую будучыню.